Связаться
Оставьте свои контакты. Мы с вами свяжемся и обсудим вашу задачу
Нажимая на кнопку, вы соглашаетесь с нашей политикой обработки персональных данных
Технологии секвенирования
Illumina Sequencing Platforms
- Для высокопроизводительного секвенирования с исключительной точностью
- Идеально подходит для проведения крупных исследований и проектов, требующих большого массива данных
- Производит до 16 Тб данных за 48 часов на один прогон с двойной ячейкой
- Секвенирование генома
- Секвенирование экзома
- Таргетное секвенирование
Illumina NovaSeq™ X Plus System
Для высокопроизводительного секвенирования коротких чтений с наименьшей стоимостью за основание
- Идеально подходит для крупномасштабных и "глубоких" проектов секвенирования
- Производит до 6 Тб данных за 20 часов
- Секвенирование генома
- Таргетное секвенирование (например, экзома)
- Секвенирование РНК
- Трансляционная онкология
- Анализ микробиома
- Готовые к загрузке секвенирования
Illumina NovaSeq™ 6000 System
Рабочий процесс Illumina
Для небольших проектов секвенирования с множественными конфигурациями
- Длина чтения до 2 x 300 п.н.
- Секвенирование ампликонов
- Секвенирование 16S
- Секвенирование небольших геномов
Illumina MiSeq™ System
Подготовка библиотеки ДНК
Для подготовки библиотеки ДНК сначала необходимо фрагментировать ДНК. Затем концы фрагментов ДНК восстанавливаются, так как они повреждаются в процессе фрагментации. Лигирование адаптеров к обеим сторонам восстановленных фрагментов ДНК завершает подготовку библиотеки ДНК. Эти адаптеры содержат последовательности мотивов, необходимые для последующих этапов (клоническое усиление и само секвенирование).
Для подготовки библиотеки ДНК сначала необходимо фрагментировать ДНК. Затем концы фрагментов ДНК восстанавливаются, так как они повреждаются в процессе фрагментации. Лигирование адаптеров к обеим сторонам восстановленных фрагментов ДНК завершает подготовку библиотеки ДНК. Эти адаптеры содержат последовательности мотивов, необходимые для последующих этапов (клоническое усиление и само секвенирование).
Мостиковая амплификация
Технология секвенирования Illumina использует так называемую мостиковую ПЦР (Bridge-PCR) для амплификации фрагментов ДНК. Эта ПЦР проводится на проточной ячейке (flow cell), стеклянной пластинке, аналогичной предметному стеклу микроскопа, на которой происходит само секвенирование. Фрагменты ДНК связываются с проточной ячейкой с помощью адаптеров, после чего проводится ПЦР. Олигонуклеотиды, связанные с проточной ячейкой, функционируют как праймеры, и каждый отдельный фрагмент ДНК формирует отдельный кластер идентичных фрагментов ДНК.
Технология секвенирования Illumina использует так называемую мостиковую ПЦР (Bridge-PCR) для амплификации фрагментов ДНК. Эта ПЦР проводится на проточной ячейке (flow cell), стеклянной пластинке, аналогичной предметному стеклу микроскопа, на которой происходит само секвенирование. Фрагменты ДНК связываются с проточной ячейкой с помощью адаптеров, после чего проводится ПЦР. Олигонуклеотиды, связанные с проточной ячейкой, функционируют как праймеры, и каждый отдельный фрагмент ДНК формирует отдельный кластер идентичных фрагментов ДНК.
Секвенирование
Секвенирование по технологии синтеза (SBS) от Illumina основано на методе циклической обратимой терминации (Cyclic Reversible Termination, CRT). Каждый из четырех нуклеотидов связан с разным красителем и модифицирован терминаторной группой. В течение цикла реакции все четыре нуклеотида одновременно предоставляются полимеразе для синтеза цепи. После включения комплементарного нуклеотида дальнейшее удлинение невозможно из-за блокирующего эффекта терминаторной группы. Четыре красителя каждого нуклеотида обнаруживаются с помощью визуализации: краситель и терминаторная группа отщепляются, и начинается новый цикл синтеза. Таким образом, последовательность каждого кластера определяется одновременно, основание за основанием.
Секвенирование по технологии синтеза (SBS) от Illumina основано на методе циклической обратимой терминации (Cyclic Reversible Termination, CRT). Каждый из четырех нуклеотидов связан с разным красителем и модифицирован терминаторной группой. В течение цикла реакции все четыре нуклеотида одновременно предоставляются полимеразе для синтеза цепи. После включения комплементарного нуклеотида дальнейшее удлинение невозможно из-за блокирующего эффекта терминаторной группы. Четыре красителя каждого нуклеотида обнаруживаются с помощью визуализации: краситель и терминаторная группа отщепляются, и начинается новый цикл синтеза. Таким образом, последовательность каждого кластера определяется одновременно, основание за основанием.
PacBio Platform
- Проекты секвенирования с длиной чтений до 25 кб и точностью 99,9%
- de novo секвенирование генома
- секвенирование РНК
- секвенирование полного транскриптома (Iso-Seq)
- секвенирование гена 16S/ITS/18S и других ампликонов
PacBio Sequel® IIe System
Рабочий процесс PacBio
Высокомолекулярная ДНК или РНК выделяется, и создается библиотека SMRTBell® путем лигирования адаптеров к двуцепочечной ДНК/кДНК, создавая циркулярную матрицу.
Фрагменты ДНК "закрываются" с обеих сторон путем лигирования шпилечных адаптеров. К библиотеке добавляются праймеры, которые могут прикрепляться к адаптерам. Далее по матрице движется полимераза.
Фрагменты ДНК "закрываются" с обеих сторон путем лигирования шпилечных адаптеров. К библиотеке добавляются праймеры, которые могут прикрепляться к адаптерам. Далее по матрице движется полимераза.
Подготовка образцов
Ячейка SMRT® содержит миллионы лунок, называемых zero-mode waveguides (ZMW). В этих лунках иммобилизованы одиночные молекулы ДНК, и полимераза встраивает меченые нуклеотиды.
В этом процессе испускается световой сигнал, и включение нуклеотидов измеряется в реальном времени. Реакции записываются и могут быть проанализированы. При секвенировании в режиме циркулярного консенсуса (CCS) генерируются высокоточные длинные чтения (HiFi), поскольку SMRT-секвенирование позволяет секвенировать одну и ту же молекулу ДНК несколько раз.
В этом процессе испускается световой сигнал, и включение нуклеотидов измеряется в реальном времени. Реакции записываются и могут быть проанализированы. При секвенировании в режиме циркулярного консенсуса (CCS) генерируются высокоточные длинные чтения (HiFi), поскольку SMRT-секвенирование позволяет секвенировать одну и ту же молекулу ДНК несколько раз.
Секвенирование
Платформа 10x Genomics®
Для анализа отдельных клеток из массива
Типичные приложения:
Типичные приложения:
- секвенирование РНК отдельных клеток
- профилирование иммунных клеток на уровне отдельных клеток
- эпигеномика отдельных клеток
10x Genomics® Chromium™ Controller
Рабочий процесс 10x Genomics®
Рабочий процесс создания библиотеки отдельных клеток начинается с объединения суспензий одиночных клеток с реактивной смесью и гелевыми бусинами с 10x баркодами. На хромиум-чипе гелевые бусины в эмульсиях (GEMs) создаются путем объединения клеток и гелевых "бусин" в одном водном потоке в канале внутри чипа. При прохождении через масло для восстановления формируются капли, которые затем собираются. Большинство собранных GEMs содержат одну гелевую бусину, и в части из них находится одиночная клетка.
Формирование GEM
После генерации GEM, гелевые бусины растворяются и освобождают олигонуклеотиды и ферменты в раствор для амплификации. Это приводит к образованию множества копий одной клетки с одинаковым штрихкодом, но уникальным молекулярным идентификатором (UMI).
После штрихкодирования фрагменты со штрихкодами объединяются, и создается окончательная библиотека. Секвенирование библиотек проводится на системах секвенирования Illumina NovaSeq™ 6000 или MiSeq с использованием технологии 10x.
После штрихкодирования фрагменты со штрихкодами объединяются, и создается окончательная библиотека. Секвенирование библиотек проводится на системах секвенирования Illumina NovaSeq™ 6000 или MiSeq с использованием технологии 10x.
Подготовка образца и секвенирование
Закажите исследование
Оставьте свои контактные данные и наши менеджеры свяжутся с Вами в ближайшее время!